Dithiothreitol (DTT) යනු බහුලව භාවිතා වන අඩු කිරීමේ කාරකයක් වන අතර එය නව හරිත ආකලන ලෙසද හැඳින්වේ.එය mercaptan කණ්ඩායම් දෙකක් (-SH) සහිත කුඩා අණුක කාබනික සංයෝගයකි.එහි අඩු කිරීමේ ගුණ සහ ස්ථායීතාවය හේතුවෙන්, DTT ජෛව රසායනය සහ අණුක ජීව විද්‍යා පරීක්ෂණ සඳහා බහුලව භාවිතා වේ.
DTT හි ප්‍රධාන කාර්යභාරය වන්නේ ප්‍රෝටීන සහ අනෙකුත් ජෛව අණු වල ඩයිසල්ෆයිඩ් බන්ධන අඩු කිරීමයි.ඩයිසල්ෆයිඩ් බන්ධනය ප්රෝටීන් නැමීමේ සහ ස්ථායීතාවයේ වැදගත් කොටසකි, නමුත් අඩු කළ හැකි SDS-PAGE විශ්ලේෂණය, ප්රෝටීන් ප්‍රතිසංයෝජනය සහ නැමීම වැනි ඇතැම් පර්යේෂණාත්මක තත්වයන් යටතේ, අවකාශීය ව්‍යුහය හෙළිදරව් කිරීම සඳහා ඩයිසල්ෆයිඩ් බන්ධනය තයෝල් කණ්ඩායම් දෙකකට අඩු කිරීම අවශ්‍ය වේ. ප්රෝටීන්.DTT හට ඩයිසල්ෆයිඩ් බන්ධන සමඟ ප්‍රතික්‍රියා කළ හැකි අතර ඒවා මර්කැප්ටන් කාණ්ඩවලට අඩු කරයි, එමඟින් ප්‍රෝටීනයේ අවකාශීය ව්‍යුහය විවෘත කර විශ්ලේෂණය කිරීම සහ හැසිරවීම පහසු කරයි.
එන්සයිම ක්‍රියාකාරිත්වය සහ ස්ථායීතාවය ආරක්ෂා කිරීමට DTT ද භාවිතා කළ හැක.සමහර එන්සයිම උත්ප්‍රේරක ප්‍රතික්‍රියා වලදී, ඔක්සිකාරකය මගින් එන්සයිමයේ ක්‍රියාකාරිත්වය අඩු විය හැක.DTT හට ඔක්සිකාරක සමඟ ප්‍රතික්‍රියා කළ හැකි අතර ඒවා හානිකර නොවන ද්‍රව්‍ය බවට අඩු කරයි, එමඟින් එන්සයිමයේ ක්‍රියාකාරිත්වය සහ ස්ථාවරත්වය ආරක්ෂා කරයි.
β-mercaptoethanol (β-ME) වැනි සාම්ප්‍රදායික අඩු කිරීමේ කාරක සමඟ සසඳන විට, DTT ආරක්ෂිත සහ වඩා ස්ථායී අඩු කිරීමේ කාරකයක් ලෙස සැලකේ.එය ජලීය ද්‍රාවණයේ ස්ථායී පමණක් නොව, ඉහළ උෂ්ණත්ව හා අම්ල-පාදක තත්ව යටතේ එහි අඩු කිරීමේ ගුණාංග ද පවත්වා ගනී.
DTT භාවිතය සාපේක්ෂව සරල ය.සාමාන්‍යයෙන්, DTT සුදුසු බෆරයක විසුරුවා හැර පසුව පර්යේෂණාත්මක පද්ධතියට එකතු කරනු ලැබේ.DTT හි ප්‍රශස්ත සාන්ද්‍රණය නිශ්චිත අත්හදා බැලීම් අනුව තීරණය කළ යුතු අතර සාමාන්‍යයෙන් 0.1-1mM පරාසයක භාවිතා වේ.අඩු සාන්ද්‍රණය මගින් සෛල වර්ධනයට අහිතකර බලපෑම් අවම කර ගත හැකි අතර ඉලක්කගත ප්‍රෝටීනවල අධික ලෙස ප්‍රකාශ කිරීම හේතුවෙන් සයිටොටොක්සිසිටි බව අඩු කළ හැක.ඉහළ සාන්ද්‍රණයන් අධික සෛල පරිවෘත්තීය බරක් ඇති කළ හැකි අතර, සෛල වර්ධනයට සහ ප්‍රකාශන කාර්යක්ෂමතාවයට බලපායි.
ප්‍රශස්ත සාන්ද්‍රණය තීරණය කිරීමේ ක්‍රමය වනුයේ විවිධ සාන්ද්‍රණයන්හි IPTG ප්‍රේරක පරීක්ෂණ පැවැත්වීමෙන් ඉලක්කගත ප්‍රෝටීනයේ ප්‍රකාශන මට්ටම ඇගයීමයි.කුඩා පරිමාණයේ සංස්කෘතික පරීක්ෂණ IPTG සාන්ද්‍රණ පරාසයක් භාවිතයෙන් සිදු කළ හැක (උදා. 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, ආදිය) සහ ඉලක්කගත ප්‍රෝටීනයේ ප්‍රකාශන මට්ටම හඳුනා ගැනීමෙන් විවිධ සාන්ද්‍රණයන්හි ප්‍රකාශන බලපෑම ඇගයීමට ලක් කළ හැක (උදා. බටහිර පැල්ලම් හෝ ප්රතිදීප්ත හඳුනාගැනීම).පර්යේෂණාත්මක ප්‍රතිඵලවලට අනුව, හොඳම ප්‍රකාශන ආචරණය සහිත සාන්ද්‍රණය ප්‍රශස්ත සාන්ද්‍රණය ලෙස තෝරා ගන්නා ලදී.
ඊට අමතරව, ඔබට සමාන පර්යේෂණාත්මක තත්වයන් යටතේ බහුලව භාවිතා වන IPTG සාන්ද්‍රණ පරාසය අවබෝධ කර ගැනීමට අදාළ සාහිත්‍යය හෝ වෙනත් රසායනාගාරවල අත්දැකීම් වෙත යොමු විය හැකිය, පසුව පර්යේෂණාත්මක අවශ්‍යතා අනුව ප්‍රශස්ත කර සකස් කළ හැකිය.
ප්‍රශස්ත සාන්ද්‍රණය විවිධ ප්‍රකාශන පද්ධති, ඉලක්ක ප්‍රෝටීන සහ පර්යේෂණාත්මක තත්ත්වයන් මත පදනම්ව වෙනස් විය හැකි බව සැලකිල්ලට ගැනීම වැදගත්ය, එබැවින් එක් එක් සිද්ධිය අනුව ප්‍රශස්ත කිරීම වඩාත් සුදුසුය.
සාරාංශයක් ලෙස, DTT යනු ප්‍රෝටීන සහ අනෙකුත් ජෛව අණු වල ඩයිසල්ෆයිඩ් බන්ධන අඩු කිරීමට සහ එන්සයිම ක්‍රියාකාරිත්වය සහ ස්ථායීතාවය ආරක්ෂා කිරීමට භාවිතා කළ හැකි බහුලව භාවිතා වන අඩු කිරීමේ කාරකයකි.එය ජෛව රසායන විද්‍යාව සහ අණුක ජීව විද්‍යා පරීක්ෂණ වලදී බහුලව භාවිතා වී ඇත.
පසු කාලය: සැප්-28-2023